Diagnostico Molecular

Consiste en la combinación de métodos proporcionados por la biología molecular y la tecnología e recombinación del ADN aplicados en el estudio de mutaciones en familias afectas con padecimientos mendelianos, en medicina legal y forense y en la detección de material genético de agentes infecciosos.

Proyecto del genoma humano

Comprende diversos proyectos encaminadas a descifrar el genoma humano con el objeto de conocer las bases moleculares de las funciones biológicas

El avance en la tecnología de estudio del ADN: vectores de clonación, enzimas de restricción, bibliotecas de genes, sondas moleculares, permitió iniciar oficialmente el proyecto del genoma humano en el año de 1990.

Herramientas utilizadas en genética molecular

Enzimas de restricción

Vectores ( microorganismos)

Transferencia southern o de ADN

Transferencia northen o de ARN

Reacción en cadena de la polimerasa PCR

Transferencia Western de proteínas

Enzimas de restricción

Enzimas que reconocen secuencias específicas de 4 8 pares de bases

Cortan en esas regiones y producen fragmentos manipulables

Tienen origen bacteriano y de ahí su nombre

(Son unas tijeritas moleculares cortando en sitios específicos del ADN se obtienen de bacterias y de ahí reciben el nombre p/e ECO R1 Escherichia Colli y corta entre G-AATTC TTAA-G son muy específicas y al cortar dan un segmento de ADN que se va a poder manipular.)

Southern Blot

Técnicas específicas de ADN (cualquier celular menos en eritrocitos ya que no tiene núcleo)

ADN se corta con enzimas de restricción y esos segmentos que están separados en un gel en electroforesis y van a migrar de tal manera que los segmentos que están más pesados irán más lentos y los cortos más rápido y luego una serie de banditas..

PRC (Reacción en cadena de la polimerasa) tmb se utiliza en inmunología para detectar procesos de inflamación en px q pueden tener artritis reumatismo y la prueba se llama proteína C reactiva

Polimerasa: enzima de síntesis de ADN

Permite replicar una secuencia fcorta y especifica de ADN,, de manera que se produzcan millones de copas

Está basada en procesos de desnaturalización y renaturalizacion del ADN y replicación del mismo

Se emplean cantidades pequeñasd e ADN

Muestras minimas de sangre, semen, pelo, etcñ

PCR-> FOTOCOPIADORA A AYUIDA MILES DE MEUSTRAS IDENTICAS PARA PODER REALIZAR UN ESTUDIO

Northen Blot

Es el método para determinar el tamaño y la abundancia de ARN

No es cortado por enzimas de restricción

ARN

Los ARN son de diferente longitud dependiendo del tamaño y numero de exones del gen transcrito

Western Blot

Las proteínas aisladas son separadas con electroforesis en gel

Se transfieren a una membrana

Se incuban con anticuerpos y después se realiza la detección con un segundo anticuerpo mediante fluorescencia o radioactividad

Información sobre el tamaño y cantidad de ps mutante

SNP’s

Cambio a nivel de un solo nucleótido

Constituyen el tipo mas común de variación

Cada 1000 ó 1200 pares de bases las secuencias difieren

En el genoma humano se calcula puede haber aproximadamente 10, 000, 000.

FISH= Hibridación in situ con fluorescencia

SKY: Cariotipo espectral (teñido x sonda)